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不銹鋼細胞生物反應器的操作方法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2025-04-29  來源:網(wǎng)絡
核心提示:一、操作前準備‌1、清洗與消毒‌ ‌拆解清洗‌:將反應器各部件(罐體、管路、電極等)拆解后,分別用洗潔精

一、操作前準備

1、清洗與消毒‌

‌拆解清洗‌:將反應器各部件(罐體、管路、電極等)拆解后,分別用洗潔精和1%氫氧化鈉溶液浸泡清洗,純化水沖洗10次以上。

‌消毒處理‌:清洗后的部件用消毒液(按比例稀釋)浸泡30分鐘,晾干后避免直接接觸表面。

‌傳感器維護‌:pH電極浸泡于飽和KCl溶液,溶氧(DO)電極更換電解液并排除氣泡,極化6小時以上。

2、罐體裝配‌

‌密封安裝‌:將罐蓋與罐體底座對齊,用內(nèi)六角工具對角均勻擰緊螺絲,確保密封性。

‌管路連接‌:通過硅膠管或快接頭連接補料瓶、排氣瓶、取樣瓶等,電極插入對應接口后手動擰緊。

二、上罐操作

1、細胞接種‌

將預培養(yǎng)的細胞懸液混合均勻后計數(shù),轉移至接種瓶并與反應器進液管無菌連接。

使用壓縮空氣將細胞懸液壓入反應器,避免細胞沉降結團。

2、參數(shù)初始化‌

‌環(huán)境設置‌:溫度設為37℃(哺乳動物細胞),溶氧40%,pH 7.0左右,通過控制面板啟動自動調(diào)節(jié)。

‌補料與通氣‌:蠕動泵控制補液速率,進氣系統(tǒng)調(diào)節(jié)氧氣壓力至0.1MPa,確保溶氧穩(wěn)定。

三、培養(yǎng)過程控制

1、動態(tài)監(jiān)測‌

‌傳感器聯(lián)動‌:實時監(jiān)測溫度、pH、DO等參數(shù),控制器自動調(diào)節(jié)攪拌速度(100–300 rpm)和補料速率。

‌在線取樣‌:每24小時取樣檢測細胞密度和代謝狀態(tài),取樣后管路末端浸入75%酒精防止污染。

2、污染防控‌

操作全程保持無菌環(huán)境,使用火焰消毒連接口,避免外界雜質進入。

四、下罐操作與維護

1、終止培養(yǎng)‌

關閉自動控制模塊,通過壓縮空氣將培養(yǎng)液排入廢液桶,斷開電極連接。

2、清洗與存儲‌

拆卸罐體組件,用純化水沖洗后以0.1M NaOH溶液浸泡過夜,徹底去除生物殘留。

干燥后存放于通風處,電極單獨存放于專用包裝盒。

五、關鍵注意事項

1、密封性檢查‌:裝配后需進行壓力測試,避免培養(yǎng)過程中泄漏。

2、參數(shù)校準‌:每次使用前需校正pH和DO電極,確保數(shù)據(jù)準確性。

3、規(guī)模放大‌遵循恒定的通氣體積與液體體積比(VVM),保障溶氧傳遞效率一致。

通過以上步驟,不銹鋼細胞生物反應器可實現(xiàn)從實驗室到中試規(guī)模的穩(wěn)定細胞培養(yǎng),適用于抗體生產(chǎn)、疫苗開發(fā)等高精度生物工藝。
編輯:songjiajie2010

 
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