組成成分
營養(yǎng)物質(zhì)
不同的細(xì)菌對(duì)營養(yǎng)的要求不同,但細(xì)菌需要的營養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)含有氨源、碳源、無機(jī)鹽類和生長因子等。
1、蛋白:最常用的成分之一, 提供細(xì)菌生長繁殖所需要的氮源,含胨、多肽和多種氨基酸,為大多數(shù)細(xì)菌生長所利用。易溶于水遇酸不沉淀,不因受高溫而凝固,為兩性電解質(zhì)有緩沖作用。
2、肉浸液:用新鮮牛肉浸泡、煮沸而制成的肉汁。含有可溶性含氮浸出物和非含氨漫出物,還有一些生長因子?蔀榧(xì)菌提供氨源和碳源,但所含氮物質(zhì)過少不能滿足細(xì)菌的需要,因此在制備培養(yǎng)基應(yīng)加入1%~ 2%的蛋白胨和0.5%氯化鈉。
3、牛肉膏:由肉浸液經(jīng)長時(shí)間加熱濃縮而制成。糖類在加熱過程中被破壞,其營養(yǎng)價(jià)值低于肉浸液,可用作腸道桿菌鑒別培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分。
4、糖類、醇類:為細(xì)菌生長提供碳源和能源。制備培養(yǎng)基所用的糖類、醇類有多種,常用的糖類有單糖、雙糖和多糖;常用的醇類有甘露醇、衛(wèi)茅醇等。葡萄糖、蔗糖主要作為碳源和能源的基本成分,其他糖類和醇類主要用于鑒定細(xì)菌所做的發(fā)酵反應(yīng)。
5、血液:血液中含有多種營養(yǎng)物質(zhì),又能提供輔酶、血紅素等特殊生長因子,用于培養(yǎng)營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌。還可根據(jù)細(xì)菌在血液培養(yǎng)基中的溶血現(xiàn)象而進(jìn)行鑒定。
6、無機(jī)鹽類:提供細(xì)菌生長的各種元素,如鉀、鈉、鐵、鎂、鈣、磷、硫等。最常用的有氯化鈉和磷酸鹽,前者維持酶的活性、調(diào)節(jié)菌體內(nèi)外的滲透壓,后者是細(xì)菌良好的磷源,并具有緩沖作用。
7、雞蛋和動(dòng)物血清:不是基本成分,是某些細(xì)菌生長所必需的營養(yǎng)物質(zhì),僅用于制備特殊的培養(yǎng)基。如培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌的雞蛋培養(yǎng)基和培養(yǎng)白喉?xiàng)U菌的呂氏血清培養(yǎng)基等。
8、生長因子:為細(xì)菌生長所必需的,需要量很小。常在肝浸液、肉浸液、醇母浸液和含血液培養(yǎng)基中加入維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等生長因子。
凝固物質(zhì)
制備固體培養(yǎng)基時(shí),需在液體中加入凝固物質(zhì)。常用凝固物質(zhì)為瓊脂,某些情況下也可用明膠、卵白蛋白、血清等。瓊脂是從石花菜中提取出來的一種半乳糖膠,溫度在98℃以上時(shí)可溶于水,在45℃以下可凝固成凝膠狀態(tài),不被細(xì)菌分解利用,無營養(yǎng)作用。
抑制劑和指示劑
制備培養(yǎng)基時(shí)常加入抑制劑和指示劑,不是細(xì)菌生長繁殖所必需的物質(zhì),而是選擇、鑒定及判斷結(jié)果的需要。
1、抑制劑:具有選擇抑制作用,在制備培養(yǎng)基 時(shí)加入定種類的抑制劑, 可抑制非檢出菌(非病原菌)的生長,利于檢出菌(病原菌)的生長,常用有膽鹽,煌綠、亞硫酸鈉、亞硒酸鈉及-些染料和某些抗生素等。
2、指示劑:在培養(yǎng)基中加入一定種類的指示劑, 觀察細(xì)菌是否利用和分解培養(yǎng)基中的糖、醇類。常用的有粉紅、甲基紅、中性紅、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍(lán)和中國藍(lán)等酸堿指示劑。亞甲藍(lán)常用作氧化還原指示劑。
種類
1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基:含有細(xì)菌基礎(chǔ)生長所需的基本營養(yǎng)成分,最常用的是肉浸液,俗稱肉湯,主要含生肉浸液和蛋白胨,用于細(xì)菌的增菌、檢驗(yàn),也是制備其他培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分。
2、營養(yǎng)培養(yǎng)基:基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入血液、 葡萄糖、生長因子等特殊成分,供營養(yǎng)要求高的細(xì)菌和需要特殊生長因子的細(xì)菌生長,最常用的是血瓊脂平板和巧克力血平板等。
3、鑒別培養(yǎng)基:在某些培養(yǎng)基中加入一些特定物質(zhì), 如糖、苷、醇類、氨基酸、蛋白質(zhì)等和指示劑,測定細(xì)菌的生化反應(yīng),以鑒別和鑒定細(xì)菌用的培養(yǎng)基。例如糖發(fā)酵管、克氏雙糖鐵瓊脂(KIA)、伊紅-亞甲藍(lán)瓊脂和動(dòng)力-吲哚-尿素(MIU) 培養(yǎng)基等。
4、選擇培養(yǎng)基:在培養(yǎng)基中加入抑制劑,抑制標(biāo)本中雜菌生長,有助于所選擇的細(xì)菌種類的生長。如培養(yǎng)腸道致病菌的沙門-志賀瓊脂。
5、特殊培養(yǎng)基:某些細(xì)菌在生長繁殖時(shí)需要特殊的條件才能夠生長,包括厭氧培養(yǎng)基和細(xì)菌L型培養(yǎng)基等。前者是培養(yǎng)專性厭氧菌的培養(yǎng)基,后者是針對(duì)細(xì)胞壁缺損的細(xì)菌L型。
分離培養(yǎng)基的選擇
1、血平板:適合各類細(xì)菌的生長,一般細(xì)菌檢驗(yàn)標(biāo)本的分離,都應(yīng)接種此平板。
2、巧克力血平板:含有V和X因子,適于接種疑有嗜血桿菌、奈瑟菌等的標(biāo)本。
3、中國藍(lán)平板或伊紅亞甲藍(lán)平板:抑制革蘭陽性細(xì)菌,促進(jìn)革蘭陰性細(xì)菌生長,是較好的弱選擇性培養(yǎng)基。發(fā)酵型革蘭陰性桿菌在此平板上菌落顏色不同,便于鑒別菌種。
4、麥康凱平板:為中等強(qiáng)度選擇性,抑菌力略強(qiáng),少數(shù)革蘭陰性菌不生長。在麥康凱平板上能否生長,是非發(fā)酵菌鑒定的一個(gè)依據(jù)。
5、沙門-志賀瓊脂:有較強(qiáng)的抑菌力,用于志賀菌和沙門菌的分離。因選擇性過強(qiáng),影響檢出率,使用時(shí)最好加一種弱選擇平板以配對(duì)互補(bǔ)。
6、堿性瓊脂或TCBS瓊脂:用于從糞便中分離霍亂弧菌及其他弧菌。
7、血液增菌培養(yǎng)基:用于從血液、骨髓中分離常見病原菌。
8、營養(yǎng)肉湯:用于標(biāo)本及各類細(xì)菌的增菌。
如痰標(biāo)本一般選用血平板、中國藍(lán)/麥康凱、巧克力平板做分離。中國藍(lán)/麥康凱用于篩選革蘭陰性桿菌;血平板則用于肺炎鏈球菌、白喉棒狀桿菌等的分離:而含桿菌肽的巧克力平板則用于篩選嗜血桿菌等。